八戒论坛正版绝杀3肖独家提供: His-tag蛋白純化磁珠

六肖特中比例多少 www.mtcqc.icu BeaverBeads? His-tag Protein Purification磁珠(組氨酸標簽蛋白純化瓊脂糖磁珠)是專為高效、快速純化組氨酸標簽蛋白而設計的一種新型功能化材料,可通過磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白,顯著地簡化了純化工藝,降低了設備需求,適合科研和工業領域便捷快速地進行組氨酸標簽蛋白的純化工作。

對比傳統的過柱層析純化方式, His-tag Protein Purification磁珠通過磁性分離方式純化組氨酸標簽蛋白,無需對粗蛋白樣品進行多次費時費力的離心、過濾步驟,無需裝柱和過柱層析,無需昂貴的柱層析設備,在1小時內便能便捷地獲得高產量和高純度的目的蛋白,且能輕松實現多樣品平行處理,顯著提高了工作效率,大大降低了設備、時間和人工成本.

本產品系列包括鎳離子(Nickel)和鈷離子(Cobalt)兩種金屬離子螯合磁珠。它們在目標蛋白結合量及所得目標蛋白純度上有所差異,一般推薦客戶使用鎳離子螯合磁珠,大多數情況下能滿足客戶對蛋白載量和純度的要求;對純度要求更高的客戶推薦使用鈷離子螯合磁珠。

His-tag Protein Purification磁珠廣泛適用于細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞等分泌或胞內表達的可溶性組氨酸標簽蛋白以及變性蛋白的純化。

產品名稱 編號 規格 包裝 單價 加入購物車
BeaverBeads? IDA-Nickel 70501-5 10%(v/v) 5mL ¥1000.00
BeaverBeads? IDA-Nickel 70501-100 10%(v/v) 2x50mL ¥5000.00
BeaverBeads? IDA-Nickel 70501-1000 10%(v/v) 4x250mL ¥30000.00
BeaverBeads? IDA-Cobalt 70502-5 10%(v/v) 5mL ¥1000.00
BeaverBeads? IDA-Cobalt 70502-100 10%(v/v) 2x50mL ¥5000.00
BeaverBeads? IDA-Cobalt 70502-1000 10%(v/v) 4x250mL ¥30000.00
BeaverBeads IDA-Nickel Kit 70501-K10 10rxns ¥1000.00
BeaverBeads IDA-Cobalt Kit 70502-K10 10rxns ¥1000.00
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1.可從粗樣品直接純化目標蛋白,極大的縮短純化時間

2. 可輕松實現對目標蛋白濃度和體積的控制

  • 通過調節洗脫緩沖液體積的方式,實現對目標蛋白濃度和體積的控制,無蛋白損失,且不存在蛋白變性、沉淀的風險。

3. 一步純化即可獲得高純度目標蛋白

海貍磁珠與市場上進口產品相比,一步純化即得到同水平高純度的目標蛋白。一個完整的操作流程即可獲得純度可以達到95%以上的目標蛋白。

 

4.平行操作穩定性高,可方便實現高通量和大規模蛋白純化

  • 目的蛋白純度和產量的標準差均<5%。
  • 完全不存在流速和樣品體積的限制,適用于高通量和大規模蛋白純化。

5.可以獲得較高的目標蛋白產率

  • 利用海貍磁珠對粗樣品進行純化,一步完整的純化流程之后,90%以上純度的目標蛋白,其產率一般達到70~80%。

6.可重復使用,再生工藝簡單

  • 由圖A、B可知,海貍磁珠反復進行多達六次再生處理,仍能保持較好的目標蛋白結合能力和純度。

      圖A. 再生6次后磁珠結合目標蛋白檢測圖譜              圖B. 再生6次后磁珠的蛋白結合量數據圖

 7. 鎳螯合磁珠與鈷螯合磁珠對不同分子量的His-tag蛋白純化對比

  • ? Co離子螯合磁珠蛋白結合量比Ni離子螯合磁珠稍低,但純度更高;
  • ? Co離子螯合磁珠洗滌和洗脫所用咪唑濃度都比Ni離子螯合磁珠低。

         圖A.鎳和鈷螯合磁珠純化His-tag Lif 蛋白                          圖B.鎳和鈷螯合磁珠純化M-MLv蛋白

                  (分子量~ 50KD)對比                                                    (分子量~ 70KD)對比

 

 

引用文獻:

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  2. Production and Stabilization of an Integrin Binding Moiety of Complement Component 3;MOLECULAR BIOLOGY  卷: 49   期: 5   頁: 723-727   出版年: SEP 2015
  3. The role of semaphorin 4D as a potential biomarker for antiangiogenic therapy in colorectal cancer;ONCOTARGETS AND THERAPY  卷: 9   頁: 1189-1204   出版年: 2016
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  5. Innovation Spaces in Asia: Entrepreneurs, Multinational Enterprises and Policy;
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  8. 人C-Src 蛋白酪氨酸激酶真核表達, 純化及活性檢測;生物技術通報 
  9. 人酪氨酸蛋白激酶Lyn的真核表達、純化及鑒定;生物技術 
  10. 一個麻風樹Kunitz型蛋白酶抑制劑基因的克隆和鑒定;四川大學學報(自然科學版) 
  11. 鋅離子依賴金屬蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7細胞增殖以及吞噬體-溶酶體的融合;細胞與分子免疫學雜志 
  12. A Novel Assay for Screening Inhibitors Targeting HIV Integrase LEDGF/p75 Interaction Based on Ni2+ Coated Magnetic Agarose Beads;SCIENTIFIC REPORTS  卷: 6     文獻號: 33477   出版年: SEP 16 2016
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  14. The role of semaphorin 4D as a potential biomarker for antiangiogenic therapy in colorectal cancer;ONCOTARGETS AND THERAPY  卷: 9   頁: 1189-1204   出版年: 2016
  15. Design, Recombinant Fusion Expression and Biological Evaluation of Vasoactive Intestinal Peptide Analogue as Novel Antimicrobial Agent;Molecules 2017, 22, 1963; DOI:10.3390/molecules22111963
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70501-02 His-tag標簽蛋白純化磁珠說明書.pdf

70501-K10組氨酸標簽蛋白純化試劑盒.pdf

His-tag蛋白純化篇
1.蛋白不吸附或親和力低
首先確認純化前的樣品中是否有目標蛋白。
(1)有目標蛋白,但大量穿透:
a、蛋白不含有標簽或未能正確表達
解決措施:Western Blot鑒定目標蛋白是否有His-Tag。若沒有,需要重新構建載體,添加組氨酸標簽,并確認標簽正確表達。
b、蛋白折疊導致組氨酸標簽未完全暴露
解決措施:
在不變性條件下純化蛋白,在樣品和平衡緩沖緩沖液中加1-2M尿素,這樣蛋白結構相對松散,而蛋白不會變性。
在變性條件下純化蛋白,加入4~8M尿素或4~6M鹽酸胍使蛋白變性。如果蛋白有二硫鍵,最好加1-2mM DTT或1~5mM巰基乙醇(在樣品中添加),可以改善蛋白的吸附。
重新構建載體,將組氨酸標簽換到另外一端,或在組氨酸標簽基因與目的基因之間增加一段Linker,可以降低蛋白折疊后標簽被掩蓋的幾率。
c、標簽太短  
解決措施:將標簽的組氨酸數量增加至6-10個。
d、蛋白標簽被水解
解決措施:添加合適的蛋白酶抑制劑;盡量在低溫下處理樣品;對于分泌表達的蛋白,長時間存放將增加蛋白被降解的風險,應盡快處理樣品。
e、蛋白溶解度偏低或聚集
解決措施:在結合緩沖液中添加0.5%-1% Tween-20、Triton X-100,或5%~50%的甘油,可以增加蛋白的溶解度,減少蛋白聚集。
f、樣品及結合緩沖液不合適
解決措施:確認樣品及緩沖液中不含有EDTA、還原劑等。另外,將樣品及結合緩沖液pH調節至7.4~8.5,有利于蛋白結合。
(2)有目標蛋白,但含量很低:
蛋白表達量低。解決措施:對樣品進行濃縮,增加磁珠用量、延長反應時間;優化表達條件(誘導劑濃度、誘導溫度、誘導時間,培養基等);或更換其他合適的表達載體或表達系統。

2.純化得到的蛋白量少
(1)磁珠用量不足。本產品磁珠懸液濃度為10%,對于親和力較高的蛋白,每毫升磁珠懸液可結合的蛋白量約為3~4mg。用戶需要根據目標蛋白含量,使用足夠量的磁珠。對于親和力較低的蛋白,需要增加磁珠用量,延長反應時間,或提高樣品及結合緩沖液pH。
(2)蛋白與磁珠親和力較低。參考問題1。
(3)蛋白濃度低。對樣品進行濃縮,或增加磁珠用量、延長反應時間。
(4)磁珠重復使用次數太多。將磁珠進行再生處理(參考產品說明書)。

3.洗脫產物雜帶多什么原因?怎么處理?
(1)雜蛋白吸附。由于組氨酸,色氨酸,半胱氨酸等是蛋白質中很常見基團,而蛋白折疊可能導致幾個這樣的氨基酸殘基臨近,這樣也會使它們和磁珠的作用力增加??梢雜貌煌ǘ鵲倪溥蚪刑荻認賜?,在樣品及平衡緩沖液中添加0.5%吐溫或Triton X-100,或5~50%的甘油,可以避免因為疏水相互作用導致非特異吸附,或使用鈷離子螯合磁珠(BeaverbeadsTM IDA-Cobalt)。此外,要獲得純度較高的蛋白,需要對裂解、結合緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液的組分、pH、咪唑濃度等進行優化。若還是不能獲得高純度的蛋白,則需要考慮使用多步純化,結合使用離子交換、凝聚過濾等純化方法。
(2)菌體破碎條件太劇烈導致蛋白斷裂。確保在冰浴條件下破碎;降低超聲破碎的強度,縮短時間;適當稀釋樣品,添加核酸酶,降低樣品粘稠度。
(3)蛋白被部分水解。添加合適的蛋白酶抑制劑,并盡可能在低溫下操作。

4.目標蛋白難洗脫
穿透組分中目標蛋白明顯減少,而洗脫組分中目標蛋白很少,取少量磁珠加SDS-PAGE Loadding Buffer于95℃加熱5~10min,離心跑電泳,如果發現較多蛋白殘留。
(1)洗脫調節太溫和。提高洗脫液咪唑濃度至700mM還不能洗脫時,可以嘗試降低洗脫液pH至4.0,但低pH會也導致金屬離子脫落,磁珠需要再生后再使用。
(2)蛋白吸附在磁珠上無法洗脫。對于非特異性疏水吸附的蛋白,可以增加NaCl濃度至1M,或添加0.1%~2%的Triton X-100洗脫。對于聚集沉淀在磁珠上的蛋白(尤其注意含有二硫鍵的蛋白),可以在洗脫緩沖液中加入6M鹽酸胍進行變性洗脫。

5.磁珠再生后,蛋白純化效果變差怎樣改善?
(1)再生過程的堿處理可以改善再生磁珠的蛋白純化效果,參考海貍生物醫學《組氨酸標簽蛋白純化試劑盒》說明書中磁珠再生部分步驟4。
(2)重新掛金屬離子后為清洗干凈,需要增加洗滌步驟。殘留的金屬離子優先跟蛋白結合,影響蛋白與磁珠的結合。

6.緩沖液中咪唑添加的意義
(1)結合緩沖液中低濃度的咪唑是為了減少雜蛋白的非特異性吸附;
(2)洗滌緩沖液中低濃度咪唑是為了吸取吸附能力較弱的雜蛋白;
(3)洗脫液中高濃度咪唑是為了洗脫目的蛋白。

7.IDA-鎳和IDA-鈷的區別
IDA-鎳的蛋白載量高,40mg/mLgel,純度稍低,純度有90%。
IDA-鈷的蛋白載量稍低,25mg/mLgel,純度達到95%。
一般客戶建議購買IDA-鎳磁珠,即可達到目的。

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海貍公司創立于2011年底,落戶在風景秀麗的蘇州工業園區獨墅湖畔生物醫藥產業園(BioBAY)。公司以納米磁珠技術和生物材料表面技術為核心,通過試劑開發和設備技術整合,面向生物科研、體外診斷和基因檢測領域,提供科研和工業級別的納米磁珠原料、蛋白偶聯中間體、免疫磁珠、核酸提取試劑盒、輔助生物耗材及配套自動化設備等系列產品。

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